产品简介
ATP 广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,是生物能量通货,能荷是描述细胞能量代谢状态的主要参数。测定 ATP 含量并且计算能荷,能够反映能量代谢状态。
HK 催化葡萄糖和 ATP 合成 6-磷酸葡萄糖,6-磷酸葡萄糖脱氢酶进一步催化 6-磷酸葡萄糖脱氢生成 NADPH ,NADPH 在 340nm 有特征吸收峰,NADPH 和 ATP 含量成正比,以此反应 ATP 含量。
样本处理方式
1、组织:按照组织质量(g):提取液体积 (mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g组织,加入 1mL 提取液),进行冰浴匀浆,8000g 4℃离心 10min,取上清至另一 EP 管中,加入500μL 的氯仿充分震荡混匀,10000g 4℃离心 3min,取上清,置冰上待测(不可用于蛋白质含量测定)。
2、细胞或细菌:先收集细胞或细菌到离心管内,弃上清,按照细菌或细胞数量(10
4个):提取液体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液),超声波破碎 1min(冰浴,强度 20%或 200W,超声 2s,停 1s),10000g 4 ℃离心 10min;取上清液至另一 EP 管中,加入 500μL 的氯仿充分震荡混匀,10000g 4℃离心 3min,取上清,置冰上待测(不可用于蛋白质含量测定)。
3、血清或血浆:按照血清(浆)体积(mL):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议取约 0.1mL 血清(浆),加入 1mL 提取液),充分震荡,10000g,4℃离心 10min;取上清液至另一 EP 管中,加入 500μL 的氯仿充分震荡混匀,10000g 4℃离心 3min,取上清,置冰上待测(不可用于蛋白质含量测定)。
注意事项
1、加入提取液离心后的上清若为浑浊为正常现象。
2、提取过程严格在冰浴条件下进行。
3、当吸光值大于 1.2 或者ΔA 测定大于 1.2 时,可以将样品稀释后进行测定。若吸光值小于 0.01,则可以增加反应时间(5min 或 10min)来测定,标准品需要增加同样的反应时间。