产品简介
PK(EC 2.7.1.40)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,催化糖酵解过程中的最后一步反应,是糖酵解过程中的主要限速酶之一,也是产生 ATP 的关键酶之一,因此测定 PK 活性具有重要意义。
PK 催化磷酸烯醇式丙酮酸和 ADP 生成 ATP 和丙酮酸,乳酸脱氢酶进一步催化NADH 和丙酮酸生成乳酸和 NAD+,在 340nm 下测定 NADH 下降速率,即可反映 PK的活性。
样本处理方式
1、组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5-10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液),进行冰浴匀浆;8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
2、细菌或细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(10
4个):提取液体积(mL) 为 500-1000:1 的比例(建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 20%或者 200W,超声 3s,间隔 10s,重复30 次);8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
3、血清或血浆:直接检测。
注意事项
1、最好两个人同时做此实验,一个人比色,一个人计时,以保证实验结果的准确性。