Annexin V-AlexaFluor 488/PI细胞凋亡检测试剂盒

产品简介

Annexin V（膜联蛋白-V）是一种分子量为 35-36KD的 Ca2+ 依赖性磷脂结合蛋白，可于磷脂酰丝氨酸（PS）选择性结合。磷脂酰丝氨酸（PS）主要分布在细胞膜内侧，即与细胞浆相邻的一侧。在细胞发生凋亡的早期，不同类型的细胞都会把磷脂酰丝氨酸外翻到细胞表面，暴露在细胞外环境中。此时，使用绿色荧光探针Alexa Fluor 488标记的 Annexin V，即Annexin V-Alexa Fluor 488，与外翻的磷脂酰丝氨酸（PS）结合，就可用流式细胞仪或荧光显微镜直接检测到磷脂酰丝氨酸的外翻这一细胞凋亡的重要特征。对于坏死或晚期凋亡的细胞，由于细胞完整性已经被破坏，Annexin V-Alexa Fluor 488则可以进入胞浆与处于磷脂层内侧的 PS 结合，从而也使坏死细胞呈现绿色荧光。

碘化丙啶（Propidium Iodide, PI）是一种 DNA 结合染料，它可以染色坏死细胞或凋亡晚期丧失细胞膜完整性的细胞的细胞核。PI可以由488，532或546 nm的激光激发，呈现红色荧光。

光谱推荐：Annexin V-Alexa Fluor 488: Ex/Em = 490/515 nm；

          PI: Ex/Em = 535/617 nm (with DNA)

注意事项

1、 使用前请将产品瞬时离心至管底，再进行后续实验。

2、 为降低细胞凋亡进程，孵育过程可在冰上操作，但孵育时间至少延长至 30 min。

3、 由于细胞凋亡是一个快速的过程，建议样品在染色后 1 h 之内进行分析。

4、 对于贴壁细胞，消化是一个关键步骤。贴壁细胞诱导细胞凋亡时如有漂浮细胞，需收集漂浮细胞和贴壁细胞后合并染色。 处理贴壁细胞时要小心操作，尽量避免人为的损伤细胞。胰酶消化时间过短，细胞需要用力吹打才能脱落，容易造成细胞膜 的损伤，PI 摄入过多；消化时间过长，细胞膜同样易造成损伤，甚至会影响细胞膜上磷脂酰丝氨酸与 Annexin V-Alexa Fluor 488的结合。消化时将胰酶铺满孔板底后，轻摇时胰酶与细胞充分接触，然后倒掉大部分胰酶，利用剩余的少量胰酶再消化一段时 间，待细胞间空隙增大，瓶底呈花斑状即可终止。在消化液中尽量不用 EDTA，EDTA 会影响 Annexin V 与 PS 的结合。

5、 贴壁细胞用胰蛋白酶消化后，建议在最佳培养条件和培养基中恢复约 30 min 后染色，避免假阳性。

6、 为了避免洗涤细胞时损失细胞，在吸液时可以用大的 Tip 头套上小的 Tip 头吸液。

7、 染料的最佳使用浓度由具体实验要求确定。

8、 荧光染料均存在淬灭问题，保存和使用过程中请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。

应用文献

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