HepG2人肝癌细胞（STR鉴定正确）

产品简介

细胞收取后处理方式

1、收到常温细胞后，第一时间检查培养瓶有无漏液、瓶身有无破损现象，如有则立即拍照并联系公司业务员；收到冻存细胞后，第一时间检查干冰是否全部已挥发、冻存管瓶盖是否脱落、破损，如有则立即拍照并联系公司业务员。

2、不要打开培养瓶盖，先用75%酒精擦拭培养瓶表面，显微镜下观察细胞状态，如有任何疑问，立即拍照清晰照片，联系公司业务员。

3、将细胞静置于细胞培养箱培养2-4小时，稳定细胞状态。

4、仔细阅读说明书，严格按照说明书上的要求进行后续操作。

5、静置完成后，取出细胞培养瓶，进行镜检、拍照（建议40×、100×、200×各一张），所拍照片将作为后续服务的依据，建议细胞传代培养之后，定期拍照、记录细胞生长状态。

细胞传代

一、悬浮细胞：

可通过补充新鲜培养基或者离心换液两种方式维持培养，离心转速参考1200 rpm（250g左右），离心3分钟。

二、贴壁细胞：

1、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。

2、 加入 0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA 于培养瓶中（T25 瓶 1-2mL，T75 瓶 2-3mL），置于 37℃培养箱中消化 1-2 分钟（难消化的细胞可以适当延长消化时间），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入 3-4mL 含 10%FBS 的培养基来终止消化。

3、轻轻打匀后吸出，在 1000RPM 条件下离心 3-5min，弃去上清液，补加 1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按 1：2 的比例分到新 T25 瓶中，添加 6-8mL 按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按 1:2~1:5 的比例进行。

细胞复苏

将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入到含 4-6mL 完全培养基的离心管中混合均匀。在 1000RPM 条件下离心 3-5min，弃去上清液，完全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含 6-8mL 完全培养基的培养瓶（或皿）中 37℃培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。

细胞冻存

收到细胞后建议在培养前 3 代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。下面 T25 瓶为例：

1、细胞冻存时按照细胞传代的过程收集消化好的细胞到离心管中，可使用血球计数板计数，来决定细胞的冻存密度。一般细胞的推荐冻存密度为 1×106~1×107个活细胞/mL。

2、1000rpm 离心 3-5min，去掉上清。用配制好的细胞冻存液重悬细胞 ，按每1mL 冻存液含 1×106~1×107个活细胞/mL 分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中，标注好名称、代数、日期等信息。

3、将要冻存的细胞置于程序降温盒中，-80 度冰箱中过夜，之后转入液氮容器中储存。同时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。

注意事项

1、HepG2细胞复苏或传代后会有少部分的细胞贴壁和部分悬浮的细胞，复苏两天后细胞会从贴壁细胞向外开始生长，有时细胞再生长过程中，细胞会再贴壁细胞的上方生长，形成不同的细胞层，这种情况会有发生。 在细胞复苏的一周内，培养瓶中 通常会有悬浮的活的细胞团，在换液过程中不要丢弃在这些活的悬浮细胞，可以通过离心（125×g）回收细胞，重新打回到培养瓶中，分离或者丢弃漂浮的活细胞会使细胞数量变少，引起细胞的停滞生长或细胞死亡。

2、培养条件的细微变化，尤其是pH和培养基中血清的质量，可能会影响细胞的生长状况，在细胞的生长过程中会有细胞内的液泡出现，特别在细胞快要融合是会出现这种情况。培养细胞时使用未被灭活的高质量、低内毒素的胎牛血清，可使细胞更好的贴壁和形成单层细胞。

3、细胞在生长过程中可以通过将血清浓度提到到20%来改善细胞生长缓慢的情况。

4、所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。

5、建议在复苏冻存细胞时始终使用防护手套、衣服和戴上防护面罩。注意：冻存管浸没在液氮中会泄漏，并会慢慢充满液氮。解冻时，液氮转化成气相可能导致容器爆炸或用危险力吹掉其盖子，从而产生飞扬的碎屑造成人员伤害。