羟脯氨酸（HYP）含量检测试剂盒

产品简介

羟脯氨酸（HYP） 是机体胶原蛋白主要成分之一，胶原蛋白大多分布于皮肤、腱、软骨和血管等，因此 HYP 含量是反映胶原组织代谢及纤维化程度的一项重要指标。

样品经水解产生游离的 HYP，进一步被氯胺 T 氧化，氧化产物与对二甲氨基苯甲醛反应，产生红色化合物，在 560nm 处有特征吸收峰。通过测定样品水解液 560nm 吸光值，可计算 HYP 含量。

试剂盒组成

样本处理方式

1、组织：称取约 0.5g 样品于玻璃管，将组织尽量剪碎以便消化，盖子稍松不密闭。加入5mL 的提取液，煮沸或 110℃烘箱 2 至6 小时消化至没有可见大的团块，16000rpm，25℃，离心 20min（若离心后仍有杂质，可通过过滤去除），用10mol/L NaOH（约3mL）调节pH 值至6～8 范围内。蒸馏水定容至 8mL，取上清待测。（过程中可能有黑色物质生成，若长时间不能消化，可能为碳化的物质）。

2、细胞或细菌：取500 万个细胞，加入1mL 的提取液，煮沸或110℃烘箱 2 至 6 小时消化至透明 状，16000rpm， 25℃，离心 20min，用10mol/L NaOH（约0.5mL）调节pH 值至6～8 范围内。 蒸馏水定容至 2mL， 取上清待测。

注意事项

1、 OD 值大于 1.0，样品适当稀释再测定，注意计算公式里乘以稀释倍数。

2、 试剂有一定的毒性，请操作时做好防护措施，防止吸入或与皮肤接触。

3、 按样本蛋白浓度计算时，需单独提取样本中的蛋白质并测定。

应用文献

※ 吕佳敏，翟科峰，段红等。基于焦亡途径研究香青兰总黄酮对博来霉素诱导的肺纤维化小鼠的作用机制。中国中药杂志，2022年12月 第47卷第24期。