α酮戊二酸脱氢酶（α-KGDH）活性检测试剂盒

产品简介

α-KGDH（EC 1.2.4.2）广泛存在于动物、植物微生物和培养细胞的线粒体中，是三羧酸循环调控关键酶之一，催化α-酮戊二酸氧化脱羧生成琥珀酰辅酶A。

α-KGDH 催化α-酮戊二酸、NAD+ 和辅酶 A 生成琥珀酰辅酶A、二氧化碳和NADH，NADH在340 nm 有特征吸收峰，以 NADH 的生成速率表示α-KGDH 活性。

试剂盒组成

样本处理方式

称取约0.1g组织或收集约500万细胞，加入1mL试剂一和10uL 试剂二，冰浴用匀浆器或研钵充分研磨，4 ℃ 11000 g 离心 10min，取上清，置冰上待测。

注意事项

1、 测定过程中所有试剂和样本在冰上放置，以免变性和失活。

2、 比色皿中反应液的温度必须保持 37℃或 25℃，取小烧杯一只装入一定量的 37℃或 25℃蒸馏水， 将此烧杯放入 37℃或 25℃水浴锅中。在反应过程中把比色皿连同反应液放在此烧杯中。

3、 最好两个人同时做此实验，一个人比色，一个人计时，以保证实验结果的准确性。

4、 测定管的ΔA 值在 0.01-0.25 之间，若测定管的ΔA 值大于 0.25，需将样本进行稀释。