YFX0156
100管/96样
¥1000
微量法
丙酮酸激酶(Pyruvate kinase,PK)(EC 2.7.1.40)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,催化糖酵解过程中的最后一步反应,是糖酵解过程中的主要限速酶之一,也是产生ATP的关键酶之一,因此测定PK活性具有重要意义。
PK催化磷酸烯醇式丙酮酸和ADP生成ATP和丙酮酸,乳酸脱氢酶进一步催化NADH和丙酮酸生成乳酸和NAD+,在340nm下测定NADH下降速率,即可反映PK活性。
名称 |
规格 |
储存条件 |
提取液 |
液体100mL ×1瓶 |
4℃ |
试剂一 |
液体20mL ×1瓶 |
4℃ |
试剂二 |
粉剂 ×2瓶:临用前取出一瓶,加入9mL试剂一和1.06mL蒸馏水充分溶解,置于37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)水浴5min;现配现用。 |
-20℃ |
试剂三 |
液体10μL ×2瓶:临用前取出一支,加入0.6mL蒸馏水充分溶解待用;现配现用。 |
4℃ |
1、组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
2、细胞/细菌:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细菌或细胞加入1mL提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10s,重复30次);8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
3、血浆/血清:直接检测。
正式测定前,必需取2-3个预期差异较大的样本做预测定。