YFX0116
50管/48样
¥280
可见分光光度法
土壤磷酸酶是一类催化土壤有机磷化合物矿化的酶,其活性的高低直接影响着土壤中有机磷的分解转化及其生物有效性,是评价土壤磷素生物转化方向与强度的指标。土壤磷酸酶受到土壤碳、氮含量、有效磷含量和 pH 显著影响。通常按照其最适 pH 范围,分为碱性、中性和酸性三种类型磷酸酶。
碱性环境中,S-AKP/ALP 催化磷酸苯二钠水解生成苯酚和磷酸氢二钠,通过苯酚与 2,6-二溴苯醌氯亚胺在碱性条件下显色,于 660nm 波长测定显色产物吸光度并结合苯酚标准品定量酚的生成量,即可计算出 S-AKP/ALP 活性。
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名称 |
规格 |
储存条件 |
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试剂一 |
液体×1瓶 |
4℃,避光 |
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试剂二 |
粉剂 ×1瓶:临用前每瓶加入50mL蒸馏水充分溶解。 |
4℃ |
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试剂三 |
液体×1瓶 |
4℃ |
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试剂四 |
粉剂 ×1瓶:临用前每瓶加入1152μL无水乙醇(自备)、48μL蒸馏水充分溶解。(溶液变褐色后不能使用) |
4℃,避光 |
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标准品 |
液体 ×1瓶:0.5μmoL/mL苯酚标准液。 |
4℃ |
1、新鲜土样自然风干或37℃度烘箱风干,过 30~50 目筛。
2、催化反应:称取风干混匀土壤约0.1g,加入50μL甲苯(自备),轻摇15min;加400μL试剂一并且摇匀后,置于37℃恒温培养箱,开始计时,催化反应 24h;到时后迅速加入 1mL 试剂二充分混匀,以终止酶催化的反应。 8000g,25℃离心 10min,取上清液置于冰上待测。
1、 本法中,ΔA的范围为 0.01~1.0,若小于0.01,可增加样本质量或适当延长反应时间;若大于1.0,高于可使用蒸馏水对上清液进行稀释,最终计算结果需同步修改。
2、 当上清液中苯酚生成浓度高于 1 mM 时,需对上清液进行适当稀释;若浓度过高,显色反应将无法完全进行,导致蓝色变浅甚至不显色,影响定量准确性。