YFX0070
100管/96样
¥350
微量法
氧自由基作用于脂质的不饱和脂肪酸,生成过氧化脂质;后者逐渐分解为一系列复杂的 化合物,其中包括 MDA。通过检测 MDA 的水平即可检测脂质氧化的水平。
MDA 与硫代巴比妥酸(thiobarbituric acid,TBA)缩合,生成红色产物,在 532nm 有最大 吸收峰,进行比色后可估测样品中过氧化脂质的含量;同时测定 600nm 下的吸光度,利用 532nm 与 600nm 下的吸光度的差值计算 MDA 的含量。
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名称 |
规格 |
储存条件 |
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提取液 |
液体100mL ×1瓶 |
室温,避光 |
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试剂一 |
液体20mL ×1瓶 |
室温,避光 |
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试剂二 |
粉剂 ×2瓶: 临用前取1瓶 加入10mL试剂一,溶解混匀,配制成工作液(可4℃保存一周)。 工作液较难溶解,可以70-90℃加热,并剧烈震荡促进溶解,或者通过超声处理促进溶解。 |
4℃ |
1、组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
2、细胞/细菌:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细菌或细胞加入1mL提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10s,重复30次);8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
3、血浆/血清:按照血浆/血清:提取液体积(mL)为1:1的比例,充分混匀,8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
1、 临用前注意试剂一是否完全溶解,如未溶解,可以70℃-90℃加热,并振荡以促进溶解。
2、 如果用高温助溶工作液,需要待其冷却至室温后再使用。
3、 为防止90℃水浴过程中水分散失,建议使用螺旋管或用封口膜给EP管缠口。
4、 待测液如果尚未澄清,可吸取上清液后再次离心。
5、 ΔA的范围为0.005-1.5,若小于0.005可增加样本质量; 若大于1.5,需要对样本进行稀释,计算结果时,乘以稀释倍数。