细胞周期与凋亡检测试剂盒

产品简介

翼飞雪细胞周期与凋亡检测试剂盒能够通过碘化丙啶染色(Propidium staining; PI staining)对细胞周期及细胞凋亡情况进行分析，适用于悬浮细胞、贴壁细胞及消化成单细胞状态的组织细胞的检测。 

PI是一种红色荧光探针，与双链DNA结合后可产生荧光，且荧光强度与双链DNA的含量成正比。PI不能被动进入具有完整质膜的细胞，所以PI的摄取与排除可用于区分活死细胞。PI能够被400-600nm之间的波⻓激发，发射波⻓是600-700nm。水溶液中PI的最大激发/发射波⻓是493/636nm，结合核酸后的最大激发/发射波⻓为535/617nm。 

PI染色后，假设G0/G1期细胞的荧光强度为1，含有双份基因组DNA的G2/M期细胞的荧光强度理论上则为2，正在进DNA复制的S期细胞的荧光强度为1-2。细胞发生凋亡时，由于细胞核皱缩和DNA片段化，部分基因组DNA片段在染色过程中丢失，在PI染色后荧光强度会小于1，经流式细胞仪检测后会出现sub-G1峰，即凋亡细胞峰。 

另外，细胞在发生凋亡时，细胞的光散射情况也会发生变化。在凋亡早期，染色质皱缩，细胞密度增加，细胞对前向角光散射的能力显著降低，而对侧向角光散射能力增加或不变；到了凋亡晚期，细胞产生凋亡小体，前向角和侧向角光散射的信号均会降低。基于本试剂盒，通过流式细胞仪能够对细胞DNA含量及光散射情况进行检测。

试剂盒组成

样本处理方式

1、悬浮细胞：收集约105-106个细胞，4℃、1000g离心3-5min，弃上清，加入1mL预冷的PBS重悬细胞，并转移到1.5mL离心管内。再次离心沉淀细胞，弃上清（可以残留约50μL左右的PBS，以避免吸走细胞）。

2、 贴壁细胞：将细胞培养液吸出，转移至合适大小的离心管内。使用PBS轻柔清洗一次贴壁培养的细胞，加入适量胰酶消化液消化细胞。室温孵育至细胞细胞形状逐渐变圆且松散，将细胞轻柔吹打下来，收集到同一离心管中，4℃、1000g离心3-5min，弃上清，加入1mL预冷的PBS重悬细胞，并转移到1.5mL离心管内。再次离心沉淀细胞，弃上清（可以残留约50μL左右的PBS，以避免吸走细胞）。

3、组织细胞：用剪刀将组织剪成尽可能小的小块，加入胰蛋白酶消化0.5-1h，经200-400目筛网过滤得到单细胞悬液。约105-106个细胞，4℃、1000g离心3-5min，弃上清，加入1mL预冷的PBS重悬细胞，并转移到1.5mL离心管内。再次离心沉淀细胞，弃上清（可以残留约50μL左右的PBS，以避免吸走细胞）。

注意事项

1、本方案仅提供一个指导方案，请根据您的具体需要摸索优化条件。

2、建议固定2h及以上时间，以更能保证染色效果，固定12-24h效果更佳。

3、细胞固定也可以采用此方案：先向细胞沉淀中加入300μL PBS，充分重悬吹散细胞后，再加入700μL 无水乙醇混匀，得到70%的乙醇固定液，可以避免细胞成团或粘连。

4、对于特定细胞，如果固定后离心时细胞沉淀不完全，建议适当延长离心时间或加大离心力，直至细胞完全沉淀。

5、细胞固定后体积会变轻，离心时易悬浮，可以将PBS替换成含2% BSA的PBS，辅助细胞沉淀。

6、去除固定液及漂洗细胞时，每次吸弃上清可保留约50μL左右的液体，以避免吸弃细胞样本。

7、染色液现用现配，当天使用。

8、上机前可使用200-400目筛网过滤细胞悬液，以得到分散的单个细胞。

应用文献

※ IF=5.6，Chen Chen,  Daolei Cui,  Jingya Li,  et al. Organophosphorus Flame Retardant TPP-Induced Human Corneal Epithelial Cell Apoptosis through Caspase-Dependent Mitochondrial Pathway. Int. J. Mol. Sci， 2024, 25,4155.

※ IF=9.8，Zi-Yue Yang,  Hai Liu,  Jiang-Ya Li,  et al.  Road dust exposure and human corneal damage in a plateau high geological background provincial capital city: Spatial distribution, sources, bioaccessibility, and cytotoxicity of dust heavy metals. Science of the Total Environment,  912 (2024) 169140.

※  IF= 8.943. Zhen-Ning Zhang,  Dan-Lei Yang, Hai Liu et al. Effects of TCPP and TCEP exposure on human corneal epithelial cells:Oxidative damage, cell cycle arrest, and pyroptosis,  Chemosphere:  331 (2023) 138817.