YFX-CLR003
1×106cells/T25培养瓶
￥1800
| 细胞简介 | RLE-6TN（大鼠肺上皮 T 抗原阴性）细胞系来源于使用链霉蛋白酶溶液进行气道灌注从 56 天大的雄性 F344 大鼠中分离的肺泡 II 型细胞。SV40-T 抗原的表达通过核免疫染色和 PCR 为阴性，表明这些细胞是通过自发永生化获得的。 该细胞系表现出肺泡 II 型细胞的特征，例如含脂质包涵体（膦 3R 染色和电子显微镜检查）和细胞角蛋白 8 和 19 的表达；细胞不表达碱性磷酸酶活性。据报道，RLE-6TN 细胞表达的几种趋化细胞因子与肺泡 II 型细胞的原代培养物相似。在裸鼠中不会致瘤。 |
| 生长培养基 | Ham's F-12+1% ITS-G+5ngmL EGF+10% FBS+ 1% P/S |
| 细胞特性 | 肺泡细胞，II型 上皮样 贴壁生长 |
| 培养条件 | 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。 |
| 推荐传代比例 | 1:2-1:4 |
| 推荐换液频率 | 2~3次/周 |
| 冻存条件 | 冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。 |
| 运输 | 冻存细胞干冰运输； 复苏细胞常温运输。 |
1、收到常温细胞后，第一时间检查培养瓶有无漏液、瓶身有无破损现象，如有则立即拍照并联系公司业务员；收到冻存细胞后，第一时间检查干冰是否全部已挥发、冻存管瓶盖是否脱落、破损，如有则立即拍照并联系公司业务员。
2、不要打开培养瓶盖，先用75%酒精擦拭培养瓶表面，显微镜下观察细胞状态，如有任何疑问，立即拍照清晰照片，联系公司业务员。
3、将细胞静置于细胞培养箱培养2-4小时，稳定细胞状态。
4、仔细阅读说明书，严格按照说明书上的要求进行后续操作。
5、静置完成后，取出细胞培养瓶，进行镜检、拍照（建议40×、100×、200×各一张），所拍照片将作为后续服务的依据，建议细胞传代培养之后，定期拍照、记录细胞生长状态。
一、悬浮细胞：
可通过补充新鲜培养基或者离心换液两种方式维持培养，离心转速参考1200 rpm（250g左右），离心3分钟。
二、贴壁细胞：
1、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。
2、 加入 0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA 于培养瓶中（T25 瓶 1-2mL，T75 瓶 2-3mL），置于 37℃培养箱中消化 1-2 分钟（难消化的细胞可以适当延长消化时间），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入 3-4mL 含 10%FBS 的培养基来终止消化。
3、轻轻打匀后吸出，在 1000RPM 条件下离心 3-5min，弃去上清液，补加 1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按 1：2 的比例分到新 T25 瓶中，添加 6-8mL 按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按 1:2~1:5 的比例进行。
将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入到含 4-6mL 完全培养基的离心管中混合均匀。在 1000RPM 条件下离心 3-5min，弃去上清液，完全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含 6-8mL 完全培养基的培养瓶（或皿）中 37℃培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。
收到细胞后建议在培养前 3 代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。下面 T25 瓶为例：
1、细胞冻存时按照细胞传代的过程收集消化好的细胞到离心管中，可使用血球计数板计数，来决定细胞的冻存密度。一般细胞的推荐冻存密度为 1×106~1×107个活细胞/mL。
2、1000rpm 离心 3-5min，去掉上清。用配制好的细胞冻存液重悬细胞 ，按每1mL 冻存液含 1×106~1×107个活细胞/mL 分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中，标注好名称、代数、日期等信息。
3、将要冻存的细胞置于程序降温盒中，-80 度冰箱中过夜，之后转入液氮容器中储存。同时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。
