YFX-CLM046
1×106cells/T25培养瓶
1550
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细胞简介 |
该细胞来源于德国DSMZ（German collection of microorganisms and cell cultures），源于C57BL/6小鼠小胶质细胞，表达核v-myc、染色体v-raf癌基因，表面表达envgp70抗原，在形态学、表型及功能上有吞噬细胞的特征。 |
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生长培养基 |
87% DMEM高糖+1% GlutaMAX-1谷氨酰胺+1% HEPES（ 1M Buffer solution）＋10% FBS＋1% P/S。 |
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细胞特性 |
上皮细胞样,松散贴壁，悬浮和贴壁细胞混合生长。 |
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培养条件 |
气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。 |
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推荐传代比例 |
1:2-1:4 |
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推荐换液频率 |
2~3次/周 |
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冻存条件 |
冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。 |
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运输 |
冻存细胞干冰运输； 复苏细胞常温运输。 |
1、收到常温细胞后，第一时间检查培养瓶有无漏液、瓶身有无破损现象，如有则立即拍照并联系公司业务员；收到冻存细胞后，第一时间检查干冰是否全部已挥发、冻存管瓶盖是否脱落、破损，如有则立即拍照并联系公司业务员。
2、不要打开培养瓶盖，先用75%酒精擦拭培养瓶表面，显微镜下观察细胞状态，如有任何疑问，立即拍照清晰照片，联系公司业务员。
3、将细胞静置于细胞培养箱培养2-4小时，稳定细胞状态。
4、仔细阅读说明书，严格按照说明书上的要求进行后续操作。
5、静置完成后，取出细胞培养瓶，进行镜检、拍照（建议40×、100×、200×各一张），所拍照片将作为后续服务的依据，建议细胞传代培养之后，定期拍照、记录细胞生长状态。
本细胞为悬浮和轻微的贴壁细胞，传代可以参考以下方法：
1、收集：将培养瓶中的悬浮的细胞收集到离心管中, 用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。由于细胞贴壁不牢PBS润洗后细胞会脱落, 所以PBS也要回收到离心管中。
2、加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL）置于37℃培养箱中消化1-2分钟（难消化的细胞可以适当延长消化时间），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3-4mL含10%FBS的培养基来终止消化。
3、将收集到的悬浮细胞、pbs清洗液中的细胞和消化下来的贴壁细胞以1000rpm离心5min，弃去上清，补加1-2mL培养液后重悬混匀后将细胞悬液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8mL按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。
将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入到含 4-6mL 完全培养基的离心管中混合均匀。在 1000RPM 条件下离心 3-5min，弃去上清液，完全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含 6-8mL 完全培养基的培养瓶（或皿）中 37℃培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。
收到细胞后建议在培养前 3 代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。下面 T25 瓶为例：
1、细胞冻存时按照细胞传代的过程收集消化好的细胞到离心管中，可使用血球计数板计数，来决定细胞的冻存密度。一般细胞的推荐冻存密度为 1×106~1×107个活细胞/mL。
2、1000rpm 离心 3-5min，去掉上清。用配制好的细胞冻存液重悬细胞 ，按每1mL 冻存液含 1×106~1×107个活细胞/mL 分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中，标注好名称、代数、日期等信息。
3、将要冻存的细胞置于程序降温盒中，-80 度冰箱中过夜，之后转入液氮容器中储存。同时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。
