小鼠琥珀酰辅酶A（SCoA）活性ELISA试剂盒

产品简介

本试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被琥珀酰辅酶A（SCoA）抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的琥珀酰辅酶A（SCoA）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品活性。

产品特点

1、准确性：标准品线性回归与预期浓度相关系数R值≥ 0.9900。

2、灵敏度：最低检测浓度小于1.0U/L。

特异性

检测小鼠相关样本中的琥珀酰辅酶A（SCoA），且与其它相关蛋白无明显交叉反应。

重复性

板内、板间变异系数均小于15%。

试剂盒组成

样本处理方式

1、血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。

2、血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心

20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

3、尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。

4、细胞：检测分泌性的成份时，用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/mL左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

5、组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4（建议组织重量与PBS体积比例为1:9，即1g组织，加入 9mL PBS）。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。

6、标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融.

7、不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

注意事项

1、从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。

2、设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL。

3、样本孔先加待测样本10μL，再加样本稀释液40μL；空白孔不加。

4、除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

5、弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。

6、每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7、每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。

应用文献

暂无。