Caspase-3活性检测试剂盒

产品简介

胱氨酸依赖性天冬氨酸定向蛋白酶（Caspases）是半胱氨酸蛋白酶家族的一员，在细胞凋亡、坏死和炎症中发挥着重要作用。Caspase 的顺序激活在细胞凋亡中发挥着重要作用。Caspase 3，又称 CPP32、Yama 或 apopain，属于 Caspase 家族的 CED-3 亚家族。Caspase 3 可以剪切 procaspase 2、6、7、9，并可以直接特异性剪切许多 caspase 底物，包括 PARP (poly (ADP-ribose) polymerase)、ICAD (Inhibitor of caspase-activated deoxyribonuclease)、gelsolin 和 fodrin 等。另外，Caspase 3 在细胞核凋亡过程中也起到了关键作用，包括染色质固缩 (chromatin condensention)、DNA 片段化 (DNA fragmentation) 等。Caspase 3 也可对细胞起泡 (Cell blebbing) 起到关键作用。

翼飞雪Caspase 3 活性检测试剂盒基于分光光度法检测 Caspase 3 的活性，Caspase 3 可以催化底物 Ac-DEVD-pNA 并产生黄色的游离 pNA，使用分光光度计在 405 nm 对pNA 的发光进行定量，进而确定 Caspase 3 的活性。

试剂盒组成

样本处理方式

1、组织：按照3-10mg组织：50-100μL裂解缓冲液的比例，加入裂解缓冲液，冰上充分匀浆后，将匀浆液冰上冰浴5min。

2、悬浮细胞：4℃ 600g离心5min收集细胞，弃上清，加入PBS洗涤细胞。按照2×106细胞：50-100μL裂解缓冲液的比例，充分悬浮细胞，冰上冰浴30min。

3、贴壁细胞：小心吸取培养液保存备用。加入适量胰蛋白酶消化细胞，再加入前面收集的培养液，轻轻混匀。4℃ 600g离心5min收集细胞，弃上清，加入PBS洗涤细胞。按照2×106细胞：50-100μL裂解缓冲液的比例，充分悬浮细胞，冰上冰浴30min。

4、4℃ 16000-20000g离心10-15min，取上清至预冷的离心管中。

注： 1）收集的上清可立即进行酶活检测，或于-80℃储存。

2）取少量上清通过Bradford法测定蛋白浓度，蛋白浓度在5mg/mL左右最佳。

注意事项

1、在本试剂盒的检测体系中，底物起始浓度为 0.2 mM。对于大多数样品，37°C 孵育 2 h 以内底物都是饱和的。对于样品中 Caspase 1 酶活力特别高的 情况，必须用裂解液稀释后再进行测定。

2、Ac-DEVD-pNA 可适当分装，避免反复冻融。

3、pNA 对人体有毒，操作时请特别小心，并注意有效防护以避免直接接触人体或吸入体内。

4、pNA (10mM) 在 4°C、冰浴等较低温度情况下会凝固而粘在离心管管底、管壁或管盖内，20-25°C 水浴全部融解即可使用。

5、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。