Caspase-1活性检测试剂盒

产品简介

半胱氨酸依赖性天冬氨酸定向蛋白酶（Caspases）是半胱氨酸蛋白酶家族的一员，在细胞凋亡、坏死和炎症中发挥着重要作用。Caspase 的顺序激活在细胞凋亡中发挥着重要作用。Caspase-1 (Interleukin 1β converting enzyme (ICE)) 是一种白细胞介素-1 转换酶，可将炎症细胞因子 IL-18 和 IL-1β 的前体蛋白水解为活性形式，通过剪切 Bcl-XL 调节细胞凋亡，并通过对各种细胞因子的作用在调节宿主对炎症刺激的反应中发挥关键作用。

翼飞雪Caspase 1 活性检测试剂盒基于分光光度法检测 Caspase 1 的活性，Caspase 1 可以催化底物 Ac-YVAD-pNA 并产生黄色的游离 pNA，使用分光光度计在 405 nm 对 pNA 的发光进行定量，进而确定 Caspase 1 的活性。

试剂盒组成

样本处理方式

1、组织：按照3-10mg组织：50-100μL裂解缓冲液的比例，加入裂解缓冲液，冰上充分匀浆后，将匀浆液冰上冰浴5min。

2、悬浮细胞：4℃ 600g离心5min收集细胞，弃上清，加入PBS洗涤细胞。按照2×106细胞：50-100μL裂解缓冲液的比例，充分悬浮细胞，冰上冰浴30min。

3、贴壁细胞：小心吸取培养液保存备用。加入适量胰蛋白酶消化细胞，再加入前面收集的培养液，轻轻混匀。4℃ 600g离心5min收集细胞，弃上清，加入PBS洗涤细胞。按照2×106细胞：50-100μL裂解缓冲液的比例，充分悬浮细胞，冰上冰浴30min。

4、4℃ 16000-20000g离心10-15min，取上清至预冷的离心管中。

注： 1）收集的上清可立即进行酶活检测，或于-80℃储存。

2）取少量上清通过Bradford法测定蛋白浓度，蛋白浓度在5mg/mL左右最佳。

注意事项

1、在本试剂盒的检测体系中，底物起始浓度为 0.2 mM。对于大多数样品，37°C 孵育 2 h 以内底物都是饱和的。对于样品中 Caspase 1 酶活力特别高的 情况，必须用裂解液稀释后再进行测定。

2、Ac-YVAD-pNA 可适当分装，避免反复冻融。

3、pNA 对人体有毒，操作时请特别小心，并注意有效防护以避免直接接触人体或吸入体内。

4、pNA (10mM) 在 4°C、冰浴等较低温度情况下会凝固而粘在离心管管底、管壁或管盖内，20-25°C 水浴全部融解即可使用。

5、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。