改良型NADP+/NADPH含量检测试剂盒 (WST-8 法)_P450系列_生化检测试剂盒_产品中心

产品简介

烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸 (Nicotinamide adenine dinucleotide phosphate, NADP) 作为辅酶参与到很多氧化还原反应中，存在氧化型 (NADP+ ) 和还原型 (NADPH) 两种形式。

翼飞雪NADP+ /NADPH 检测试剂盒（WST-8 法）是无需从样品中纯化 NADP+ /NADPH，基于 WST-8 的显色反应，通过比色法检测细胞、组织或其他样品中氧化型辅酶 Ⅱ (NADP+ ) 和还原型辅酶 Ⅱ (NADPH) 各自的含量、比值及总含量的试剂盒。

名称	规格	储存条件
NADP+/NADPH提取液	50mL	-20℃，避光；避免反复冻融。
NADPH	0.5mg
G6PDH	200μL
显色液	1.1mL
反应缓冲液	10mL
1、NADPH标准溶液的配制：使用0.6mL 超纯水充分溶解NADPH，配制成1mM NADPH标准溶液。 2、NADPH标准曲线的设置：用NADP+/NADPH提取液将1mM NADPH标准溶液梯度稀释为0μM、0.25μM、0.5μM、1μM、2μM、6μM几种浓度，在96孔板每孔加入10μL标准液，即每孔标准品含量为0pmoL、2.5pmoL、5pmoL、10pmoL、20pmoL、60pmoL。（注：标准品浓度0μM为空白对照，仅含NADP+/NADPH提取液） 3、G6PDH工作液的配制：取适量G6PDH母液，用反应缓冲液将其稀释50倍，制备成G6PDH工作液。（注：G6PDH工作液需现用现配，每个标准品或样品需要90μL G6PDH工作液，根据所需用量配制）

1、组织：用预冷的PBS清洗组织，取10-30mg组织样品，用剪刀剪碎置于匀浆器中，加入预冷的400µL NADP+/NADPH提取液，冰上匀浆，4℃ 12000g离心10min，取上清待测。

2、贴壁细胞：取1×106个细胞（6孔板单孔长满细胞数量），尽可能吸除培养液，加入预冷的200µL NADP+/NADPH提取液，冰上轻轻吹打约10min使细胞裂解，4℃ 12000g离心10min，取上清待测。

3、悬浮细胞：取1×106个细胞，600g 离心5min，尽可能吸除培养液，加入预冷的200µL NADP+/NADPH提取液，冰上轻轻吹打约10min使细胞裂解，4℃ 12000g离心10min，取上清待测。

1、使用前，将冻存的各组分充分融解并轻轻混匀后再使用。

2、 NADPH配制成溶液后，适当分装后-80℃储存；如发现标准曲线不理想，有可能是标准品发生了降解。

3、 NADP+/NADPH提取液比较粘稠，稀释过程中务必保证稀释均匀，否则易造成实验数据不稳定。

4、检测过程中，应尽量避免产生气泡，以免影响最终的吸光度值的测定。

5、每次检测都要重新绘制标准曲线。

6、 NADP+和NADPH不稳定，在冻存过程中容易降解，建议使用新鲜样品进行检测。

7、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。