YFX0703
100T
￥1300
酶标仪或分光光度计
烟酰胺腺嘌呤二核苷酸 (Nicotinamide adenine dinucleotide, NAD) 作为辅酶参与到很多氧化还原反应中，存在氧化型 (NAD+ ) 和还原型 (NADH) 两种形式。
翼飞雪NAD+ /NADH 含量检测试剂盒（WST-8 法）基于 WST-8 的显色反应，无需从样品中纯化NAD+ /NADH，通过比色法检测细胞、组织或其他样品中氧化型辅酶 I (NAD+ ) 和还原型辅酶I (NADH) 分别的含量、比值及总含量的试剂盒。
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名称 |
规格 |
储存条件 |
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NAD+/NADH提取液 |
50mL |
-20℃，避光； 避免反复冻融。 |
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NADH |
0.5mg |
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NADH溶解液 |
1mL |
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乙醇脱氢酶 |
0.5mL |
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显色液 |
1.1mL |
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反应缓冲液 |
10mL |
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1、NADH标准溶液的配制：使用665μL NADH溶解液溶解NADH，配制成1mM NADH标准溶液。（注：由于NADH不稳定，需现用现配，建议1mM的NADH溶液适当分装并于-80℃避光储存） 2、NADH标准曲线的设置：用NAD+/NADH提取液将1mM NADH标准溶液梯度稀释为0μM、0.25μM、0.5μM、1μM、2μM、4μM、6μM、8μM、10μM等几个浓度，在96孔板每孔加入20μL标准液，即每孔标准品含量为0pmoL、5pmoL、10pmoL、20pmoL、40pmoL、80pmoL、120pmoL、160pmoL、200pmoL。（注：标准品浓度0μM为空白对照，仅含NAD+/NADH提取液） 3、乙醇脱氢酶工作液的制备：每个标准品或样品需要90μL 乙醇脱氢酶工作液，根据实验样品用反应缓冲液将其稀释到20倍工作液。（注：乙醇脱氢酶工作液现用现配） |
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1、组织：用预冷的PBS清洗组织，取10-30mg组织样品，用剪刀剪碎置于匀浆器中，加入预冷的400µL NAD+/NADH提取液，冰上匀浆，4℃ 12000g离心10min，取上清待测。
2、贴壁细胞：取1×106个细胞（6孔板单孔长满细胞数量），尽可能吸除培养液，加入预冷的200µL NAD+/NADH提取液，冰上轻轻吹打约10min使细胞裂解，4℃ 12000g离心10min，取上清待测。
3、悬浮细胞：取1×106个细胞，600g 离心5min，尽可能吸除培养液，加入预冷的200µL NAD+/NADH提取液，冰上轻轻吹打约10min使细胞裂解，4℃ 12000g离心10min，取上清待测。
1、 使用前，将冻存的各组分充分融解并轻轻混匀后再使用。
2、 NADH配制成溶液后，适当分装后-80℃储存；如发现标准曲线不理想，有可能是标准品发生了降解。
3、 NAD+/NADH提取液比较粘稠，稀释过程中务必保证稀释均匀，否则易造成实验数据不稳定。
4、 检测过程中，应尽量避免产生气泡，以免影响最终的吸光度值的测定。
5、 每次检测都要重新绘制标准曲线。
6、 NAD+和NADH不稳定，在冻存过程中容易降解，建议使用新鲜样品进行检测。
7、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
