YFX-CLM020
1×106cells/T25培养瓶
￥1500
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背景描述 |
MC-38细胞源自C57BL/6小鼠的结肠腺癌细胞系是广泛用于结直肠癌研究的小鼠模型。该细胞系展现出高突变率，特别是在mutanome（突变谱）和neoantigen（新抗原）表达方面，使它们对免疫检查点抑制剂疗法高度敏感。它们对内源性CD8+ T细胞攻击新抗原的反应性突显了它们在研究肿瘤环境中免疫相互作用中的价值，定位MC-38模型为关键的免疫反应性小鼠肿瘤模型。MC-38细胞在同源C57BL6小鼠宿主或免疫缺陷小鼠中形成肿瘤和转移。特别是在正位小鼠模型中使用的MC-38结肠腺癌模型，因其免疫反应性而受到认可，使其成为评估免疫疗法的有效平台，包括放射疗法、检查点抑制剂和其他新型治疗方法。MC-38细胞表达诸如claudin-1和SATB2等结肠标志物，这对于研究结直肠腺癌的基因组和表观基因组基础以及识别潜在治疗方法至关重要。MC-38异种移植模型的免疫学特性使其成为癌症研究的多功能工具，尤其是在结直肠腺癌的背景下。MC-38结肠腺癌模型，凭借其高mutanome和neoantigen负荷，作为一个典型的免疫反应性小鼠模型，促进了结直肠肿瘤细胞系与宿主免疫系统之间复杂动态关系的探索。 |
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细胞形态 |
上皮细胞样； 半悬浮、半贴壁生长。 |
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规格 |
>1×106ceLLs，T25瓶或者1mL冻存管包装。 |
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细胞来源 |
小鼠结肠腺癌。 |
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培养基 |
DMEM+ 10% FBS+ 1% P/S+ 1% MEM NEAA非必需氨基酸+ 1%丙酮酸钠+ 1% GlutaMAX-1谷氨酰胺+ 1% HEPES。 |
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培养条件 |
气相：空气，95%；二氧化碳，5%； 温度：37℃；培养箱湿度为70%-80%。 |
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细胞检测 |
不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。 |
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传代比例 |
1:2-1:5；第一次收到细胞建议T25培养瓶1：2传代。 |
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换液频率 |
2-3天。 |
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细胞冻存液 |
无血清冻存液。 |
1、收到细胞后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请拍照后及时联系我们。
2、请在4或5×显微镜下确认细胞状态，同时给刚收到的细胞拍照（10×，20×）各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存，作为售后时收到时细胞状态的依据。
3、悬浮细胞：T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，然后抽出瓶中的培养基和细胞1000rpm离心5分钟，弃去上清重悬后接种到新的培养瓶中（加入按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基）。
4、贴壁细胞：细胞在37℃培养箱中放置2-3h，显微镜下观察细胞的生长和贴壁情况，有些贴壁细胞在快递运送过程中会因振动脱落和脱落后成团的情况。若镜下观察细胞的生长密度若在60%以下，可去除培养瓶中灌液培养基（若有未贴壁的细胞需要离心回收，重悬打入到原培养瓶中）,加入新配制的完全培养基6-8mL，放到细胞培养箱中继续培养。若细胞生长密度达70%-80%以上，可以对细胞进行传代处理。传代过程中，若因运输振动脱落的细胞需要离心回收。
5、半贴壁、半悬浮细胞：T25瓶置于37℃培养箱中约2-3h，显微镜下观察细胞的情况，若细胞密度在60%以下，客户需收集T25瓶中的悬浮细胞离心后用完全培养基重悬后打回到原培养瓶中继续培养，若细胞生长70%-90%对细胞进行传代，传代时需要收集培养基中悬浮的细胞离心后回收。
6、备注：运输用的培养基不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。 收到细胞后第一次传代建议T25培养瓶1：2传代 。
对于半贴壁、半悬浮细胞传代可以参考以下方法：
1、在生物安全柜内，将培养瓶中的悬浮细胞收集到离心管中。
2、贴壁细胞用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次，由于细胞贴壁不牢，润洗后细胞可能会脱落到PBS溶液中，因此润洗后的PBS溶液也要收集到离心管中。
3、向瓶内加入1-2mL 0.25％胰蛋白酶（含EDTA），浸润底面后放入 37℃ CO2 培养箱中孵育2~3min，显微镜下观察细胞的消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻拍培养瓶，待95%左右的细胞脱落后，加入5mL以上含10% FBS的完全培养基终止消化。
4、将收集到的悬浮细胞、pbs清洗液中的细胞和消化下来的贴壁细胞1000rpml离心5min，弃去上清，补加1-2mL培养液后重悬混匀后将细胞悬液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力。（即1个T25传代接种至2~3 个T25或者2~3个直径为6cm的培养皿）。
收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。下面T25瓶为例；
1、选择指数生长期的细胞，细胞冻存时按照细胞传代的过程收集消化好的细胞到离心管中，可使用血球计数板计数，来决定细胞的冻存密度。一般细胞的推荐冻存密度为1×106-1×107个活细胞/mL。
2、1000rpm离心3-5min，去掉上清。用配制好的细胞冻存液重悬细胞 ，按每1ml冻存液含1×10^6~1×107个活细胞/ml分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中，标注好名称、代数、日期等信息。
3、按冻存数量加入无血清冻存液后直接放-80℃冰箱过夜，后续可转入液氮罐中长期保存。
1、将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻。
2、加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀。
3、弃去上清液，完全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基接种于 T25培养瓶中（或6cm皿中），培养过夜，第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。
4、如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。
1、所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。
2、从液氮中取出细胞冻存管时，若冻存管内有液氮进入，需拧松冻存管，排出内部残留的液氮，之后拧紧冻存管，置于干冰上，然后放入 37℃水浴中，避免温差太大造成液氮快速气化而爆炸。
