YWB016
100mL
￥120
Western及IP细胞裂解液要由Tris-HCl、NaCl、低浓度Triton X-100，低浓度sodium pyrophosphate等组成，不含蛋白酶、磷酸酶抑制剂，并维持原有的蛋白间相互作用。
Western及IP细胞裂解液采用一种非变性裂解方法来裂解细胞，并获得总蛋白的裂解液，所获得的蛋白质可以用于PAGE电泳，Western，免疫沉淀(IP)和免疫共沉淀(Co-IP)等。
用Western及IP细胞裂解液得到的蛋白，可以用BCA蛋白定量试剂盒测定蛋白浓度，但由于含有较高浓度的Triton X-100等干扰物质，不宜用Bradford法测定蛋白浓度。
A. 贴壁细胞
1、取Western及IP细胞裂解液室温混匀，根据不同需要添加所需要蛋白酶抑制剂或磷酸酶抑制剂。
2、去除贴壁细胞的培养液，用PBS或NS或无血清培养基清洗细胞，低速离心去上清，留取沉淀。
3、按照6孔板每孔加入100-200μL本裂解液的比例，加入Western及IP细胞裂解液。使用移液器轻轻吹打小包脱落后，再轻轻吹吸，使裂解液与细胞充分混匀（1-5s内，细胞即可充分被裂解）。
4、10000-12000离心3-5min（建议使用冷冻离心机 4℃离心），吸取上清液。
5、进行后续的SDS-PAGE、Western、免疫沉淀、免疫共沉淀操作。
B. 悬浮细胞
1、取Western及IP细胞裂解液室温混匀，根据不同需要添加所需要蛋白酶抑制剂或磷酸酶抑制剂。
2、低速离心，弃上清，收取沉淀。
3、用手指轻弹细胞，使其松散。按照6孔板每孔加入100-200μL本裂解液的比例，加入Western及IP细胞裂解液（通常100μL裂解液足够，如细胞数量非常高，可以用量到150-200μL），用手指轻弹以充分裂解细胞（直至没有明显的 细胞沉淀）。
4、10000-12000离心3-5min（建议使用冷冻离心机 4℃离心），吸取上清液。
5、进行后续的SDS-PAGE、Western、免疫沉淀、免疫共沉淀操作。
C. 组织样本
1、取Western及IP细胞裂解液室温混匀，根据不同需要添加所需要蛋白酶抑制剂或磷酸酶抑制剂。
2、把组织剪成尽可能小的碎片，在液氮或超低温冰箱中冷冻30min以上，迅速用液氮研磨（1-2min完成研磨，以减少蛋白的降解）。
3、按照每20mg组织加入100-200μL本裂解液的比例，加入Western及IP细胞裂解液，冰上或4℃裂解30-60min。
4、（可选）如无液氮，可以按照每20mg组织加入100-200μL本裂解液的比例，加入Western及IP细胞裂解液，用玻璃匀浆器或组织研磨器匀浆，直至充分裂解（1-2min完成研磨，以减少蛋白的降解）。
5、10000-12000离心3-5min（建议使用冷冻离心机 4℃离心），吸取上清液。
6、进行后续的SDS-PAGE、Western、免疫沉淀、免疫共沉淀操作。
1、去除贴壁细胞的培养液时，如果血清中的蛋白没有干扰，可以不用清洗。
2、贴壁细胞如过于牢固，可使用细胞刮刀轻轻刮下来，如蛋白后续实验进行IP或Co-IP，不建议使用胰酶消化细胞。
3、如果裂解不充分，可以适当增加裂解液的用量，如果需要高浓度的蛋白，可以适当减少裂解液的用量。
4、如果细胞数量较多，必需分装成50-100万细胞/离心管，然后再裂解（大团的细胞难以裂解充分，而少量的细胞由于裂解液容易和细胞充分接触，相对比较容易充分裂解）。
